玉米病程相关蛋白1基因的克隆与表达分析
时间： 2012-03-21 点击次数：次
Journal: 浙江大学学报，2011，38
Author: 王静，刘丽，张志明，赵茂俊，潘光堂
Abstract:
采用逆转录聚合酶链式反应(RT‐PCR)方法从耐玉米穗粒腐病自交系R１５ 中分离得到病程相关蛋白１(pathogenesis‐related protein １ , PR１)基因的开放阅读框,命名为ZmPR1 ,测序结果显示该序列长为５２８ bp ,编码１７５ 个氨基酸,其蛋白质分子质量为１８ .７ ku .利用NCBI/Blastp 和Genedoc 软件进行同源性比对显示,ZmPR1 基因编码蛋白与水稻、小麦、拟南芥等高等植物中的PR１ 蛋白相似性较高,且具有相同的富含半胱氨酸蛋白(cysteine‐rich secretory protein , CAP) 的保守结构域.将构建的重组载体pET３２a( ＋ )‐ZmPR１ 在宿主菌Escherichia coli BL２１ 中经异丙基硫代‐β‐D‐半乳糖苷( IPTG) 诱导表达融合蛋白,在不同的诱导时间、诱导温度和IPTG 诱导浓度下对诱导条件进行优化.十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS‐PAGE) 分析结果表明,ZmPR1 基因的最佳诱导条件为IPTG 终浓度０.６mmol.L -１ ,诱导温度２８ ℃ ,且诱导时间对表达量影响不大.免疫印迹(Western blot)检测证实有３９ ku的融合蛋白表达,表明ZmPR1 基因在大肠杆菌中已成功表达,这为蛋白纯化及单克隆抗体的制备提供了一定的基础。
Link: http://www.journals.zju.edu.cn/agr/CN/abstract/abstract9950.shtml
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